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南開(kāi)大學(xué)陳弓團(tuán)隊(duì)JACS:甲醛“縫合”的復(fù)雜環(huán)肽拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)

來(lái)源:化學(xué)加原創(chuàng)      2022-06-02
導(dǎo)讀:近日,南開(kāi)大學(xué)陳弓教授課題通過(guò)對(duì)甲醛多組合交聯(lián)化學(xué)的拓寬和優(yōu)化,發(fā)展了升級(jí)版的am-a-gu反應(yīng)從而實(shí)現(xiàn)無(wú)保護(hù)多肽的“縫合”修飾,構(gòu)建出了更加復(fù)雜、新穎且具有拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的多環(huán)肽分子,豐富了復(fù)雜多肽的化學(xué)空間,相關(guān)工作最近發(fā)表在Journal of the American Chemical Society上 (DOI:10.1021/jacs.2c04620)。

利用化學(xué)修飾手段對(duì)線性多肽進(jìn)行結(jié)構(gòu)約束是近年多肽藥物化學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)熱門課題。 其中大環(huán)化是多肽修飾最有效的手段之一, 通過(guò)對(duì)線性肽上的多個(gè)側(cè)鏈進(jìn)行交聯(lián)形成多環(huán)環(huán)肽也為具有新穎拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的生物活性分子構(gòu)建提供新思路。目前制備多環(huán)肽的策略通常是將預(yù)制好的模板分子連接到線性肽的側(cè)鏈上,這種“嫁接式”的多環(huán)化策略大多被具有高反應(yīng)活性的半胱氨酸所“壟斷”。因此需要發(fā)展新的具有高靈活度和廣泛適用性的復(fù)雜多環(huán)肽合成策略(圖1a)。


圖 1. 化學(xué)選擇性修飾構(gòu)建多環(huán)環(huán)肽

2021年,陳弓課題組利用簡(jiǎn)單的甲醛分子(a)實(shí)現(xiàn)了對(duì)賴氨酸 (Lys,K)和酪氨酸 (Tys,Y)以及賴氨酸 (Lys,K)和精氨酸 (Arg,R)之間的交聯(lián)反應(yīng),從而開(kāi)發(fā)了一套簡(jiǎn)單實(shí)用的策略用于“裝訂”天然多肽(Angew. Chem. Int. Ed. 2021, 60, 6646-6652),分別命名為KaY和KaR反應(yīng)。在KaR反應(yīng)中,研究人員發(fā)現(xiàn)甲醛可與胍基和氨基選擇性高效縮合生成四氫三嗪結(jié)構(gòu) (tetrahydrotriazine, THT)(圖1b)。在此基礎(chǔ)上,課題組對(duì)該多組分縮合反應(yīng)進(jìn)一步探究。

近日陳弓教授實(shí)驗(yàn)室升級(jí)并拓展了KaR反應(yīng),利用胺-甲醛-胍(am-a-gu,am代指胺,gu代指胍)三組分反應(yīng)實(shí)現(xiàn)了一種具有廣泛底物普適性和高靈活度的新型多環(huán)化方法。作者通過(guò)使用胍基試劑以及簡(jiǎn)單的甲醛水溶液,在溫和的條件下便可以實(shí)現(xiàn)對(duì)未保護(hù)的多肽的“縫合”修飾,得到結(jié)構(gòu)新穎的稠合四氫三嗪環(huán)結(jié)構(gòu)(Fused-THT)的同時(shí),還可以構(gòu)建出復(fù)雜、新奇的多環(huán)肽結(jié)構(gòu)(圖2)。


圖 2 胺-甲醛-胍三組分反應(yīng)構(gòu)建多環(huán)肽

在底物1中,作者在序列中引入了兩個(gè)Lys和一個(gè)Arg,以HFIP為溶劑并加入甲醛,室溫下5個(gè)小時(shí)即可高效地構(gòu)建稠合的四氫三嗪環(huán)連接結(jié)構(gòu),并得到了一對(duì)具有區(qū)域異構(gòu)的雙環(huán)多肽(trace-2),并將這類多組分反應(yīng)命名為K(2)-a-R反應(yīng),并且該反應(yīng)同樣也可以在堿性的PBS緩沖液中順利進(jìn)行(trace-4)。

普適性研究中,大多數(shù)極性的官能團(tuán)均不會(huì)干擾該反應(yīng),如羧基(Glu),羥基(Thr),咪唑(His),巰基(Cys)可以通過(guò)對(duì)序列的調(diào)整從而規(guī)避其對(duì)反應(yīng)的干擾(9)。將N端甘氨基作為成環(huán)組分進(jìn)行GK-a-R成環(huán)時(shí)產(chǎn)率較低(12),主要以單環(huán)產(chǎn)物(13);而將N端換成更長(zhǎng)的6-氨基己酸時(shí)產(chǎn)率得到明顯提升(14)。作者還可以將K(2)-a-R反應(yīng)成功應(yīng)用到構(gòu)建具有巢狀拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的三環(huán)多肽(11)。


圖 3 K(2)-a-R反應(yīng)

接著作者又將K(2)-a-R反應(yīng)中的固定在肽鏈上的胍基部分(Arg)移除,并引入了鹽酸胍作為胍基組分,同樣實(shí)現(xiàn)了多組分縮合反應(yīng)并構(gòu)建了一系列環(huán)肽分子,甲醛和胍將多肽上兩個(gè)Lys交聯(lián)起來(lái)構(gòu)建環(huán)肽的反應(yīng),作者命名為K(2)-a-gu反應(yīng)(gu代指胍)。

如圖4所示,以含有兩個(gè)Lys線性肽作為模板肽鏈,加入鹽酸胍和甲醛,以TFE作為溶劑,室溫反應(yīng)5 h即可高效地得到單一區(qū)域異構(gòu)體環(huán)肽產(chǎn)物16。同時(shí)該反應(yīng)也可以在水和TFE的混合溶劑中進(jìn)行,部分水溶性較好的底物可以在PBS緩沖溶液中順利進(jìn)行。該反應(yīng)可以兼容幾乎所有的氨基酸種類,并且兩個(gè)Lys間距長(zhǎng)短對(duì)反應(yīng)的影響也不是很大。各種胍的衍生物如炔基胍、芐基胍(32)、丹磺酰胍(33)以及環(huán)胍(35)也能夠高效率參與到K(2)-a-gu反應(yīng)中。此外該反應(yīng)也可以在固相上高效進(jìn)行,避免了因液相反應(yīng)中濃度過(guò)高產(chǎn)生的分子間交聯(lián)副反應(yīng)的同時(shí),也為高通量合成這類環(huán)肽分子奠定了可能。


圖 4 K(2)-a-gu反應(yīng)

從環(huán)胍產(chǎn)物35中得到啟發(fā),作者又利用甲醛、鹽酸胍對(duì)線性肽鏈上三個(gè)Lys進(jìn)行關(guān)環(huán),從而高效地得到三環(huán)稠合的三嗪環(huán)(tris-THT)結(jié)構(gòu)并“縫合”出產(chǎn)物37。作者將甲醛和胍以及多肽上三個(gè)Lys交聯(lián)起來(lái)構(gòu)建雙環(huán)肽的反應(yīng)命名為K(3)-a-gu反應(yīng)。

該反應(yīng)同樣可以兼容各種極性氨基酸(Glu、Asn、Thr等)。此外,同樣利用內(nèi)酰胺成環(huán)的環(huán)肽,再經(jīng)過(guò)K(3)-a-gu反應(yīng)從而得到具有類似鳥(niǎo)巢拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的產(chǎn)物48。最后作者通過(guò)一鍋法,先采用K(2)-a-gu反應(yīng)得到bis-THT結(jié)構(gòu)的環(huán)肽后,再與另外一分子丁胺進(jìn)行二次縮合得到雜合tris-THT結(jié)構(gòu)的環(huán)肽49。


圖 5 K(3)-a-gu反應(yīng)

為展示此類反應(yīng)的應(yīng)用潛力,陳弓課題組同南開(kāi)大學(xué)郭東升課題組進(jìn)行合作,利用這類三組分反應(yīng)所產(chǎn)生的bis-THT和Tris-THT親水性“帽子”嫁接到杯芳烴下緣上(51和55),從而形成具有一定大小的空腔。利用1H NMR滴定法進(jìn)行鹵負(fù)離子 (F-, Cl-, Br-) 的絡(luò)合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),這種稠合的四氫三嗪環(huán)修飾得到的產(chǎn)物 (55) 室溫下在氘代氯仿中能夠選擇性與F-結(jié)合 (3.64 × 103 M?1) ,而未形成Tris-THT結(jié)構(gòu)的54則與F-有著較弱的結(jié)合能力 (Ka=1.60 × 102 M-1) 。


圖 6


圖 7

理論計(jì)算部分,中科院有機(jī)所的薛小松課題組通過(guò)密度泛函理論(DFT)對(duì)反應(yīng)進(jìn)程進(jìn)行了揭示(圖7)。首先以甲醛、甲胺、胍之間的反應(yīng)模擬反應(yīng)體系,對(duì)反應(yīng)初始的兩種可能啟動(dòng)路徑進(jìn)行了理論計(jì)算,結(jié)果表明, pathway II中啟動(dòng)步驟在動(dòng)力學(xué)上更為有利。質(zhì)子化的胍基57經(jīng)歷脫質(zhì)子化后繼續(xù)與甲醛反應(yīng)生成胍的羥甲基化產(chǎn)物59,再質(zhì)子化并脫水得到胍亞胺產(chǎn)物61,此時(shí)甲胺作為親核試劑進(jìn)攻胍亞胺并跨越18.7kcal/mol能壘生成第一步分子間交聯(lián)產(chǎn)物,該途徑能夠釋放足夠的能量(ΔG= -13.1 kcal / mol),為完成整個(gè)反應(yīng)提供了強(qiáng)大的驅(qū)動(dòng)力。同時(shí)作者發(fā)現(xiàn)胍與胍、胺與胺的同質(zhì)交聯(lián)(homo-crosslinking)產(chǎn)物能量均高于異質(zhì)交聯(lián)產(chǎn)物,這為多氨基體系中優(yōu)先選擇性地發(fā)生異質(zhì)交聯(lián)提供了理論依據(jù)。

綜上,陳弓教授課題通過(guò)對(duì)甲醛多組合交聯(lián)化學(xué)的拓寬和優(yōu)化,在之前工作的基礎(chǔ)上發(fā)展了升級(jí)版的am-a-gu反應(yīng)從而實(shí)現(xiàn)無(wú)保護(hù)多肽的“縫合”修飾,構(gòu)建出了更加復(fù)雜、新穎且具有拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的多環(huán)肽分子,豐富了復(fù)雜多肽的化學(xué)空間,相關(guān)工作最近發(fā)表在Journal of the American Chemical Society上 (DOI:10.1021/jacs.2c04620)。


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