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支原體污染PCR檢測試劑盒 檢測支原體污染 靈敏度高 使用方便 涵蓋所有常見支原體污染種類

支原體污染PCR檢測試劑盒 檢測支原體污染 靈敏度高 使用方便 涵蓋所有常見支原體污染種類

CAS號 0-00-0
規格 20次反應
純度 實驗室純度
貨號 Myco-P-50
貨期 3天
品牌 炎熙生物
庫存 10000包
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參考價: ¥548.00 元/包
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產品詳情

詳細信息(中文):
支原體污染PCR檢測試劑盒
PCR Detection Kit for Mycoplasma Contamination

貨號 規格
Myco-P-20 20次反應
Myco-P-50 50次反應
Myco-P-100 100次反應

支原體污染PCR檢測試劑盒,用于檢測細胞培養中的支原體污染,也可作為支原體通用檢測試劑盒使用,可檢測屬于柔膜菌綱(Mollicutes)的支原體、脲原體、無膽甾支原體、螺原體、蟲原體、中間原體等超過一百種,與柔膜菌綱以外的其他微生物沒有特異性反應。
支原體是一種直徑約為0.1-0.3 μm、無細胞壁的原核生物,具有變形能力,屬于柔膜菌綱,常被用作柔膜菌綱的統稱。支原體是最小的具有完整細胞結構的生物,可透過常見過濾膜(0.22-0.45 μm),因此常規的無菌過濾方法不能將其去除,靶向細胞壁的抗生素也對支原體無效。支原體種類繁多,通常為寄生性或腐生性,有些種類可作為正常共生菌存在,有些種類具有致病性,還有一些種類具有細胞侵入性。
支原體污染是基礎研究和工業生產中一個很常見的問題,據報導,有5-35%的細胞株受到污染;一些實驗室由于對此不夠重視,實際上可能有高達80%以上的細胞株發生支原體污染。支原體在光學顯微鏡下不可見,對培養基的需求有限,一般不會引起培養物混濁,因此細胞被支原體污染一般難以察覺。支原體污染能消耗營養物,促進代謝積累,導致pH改變,誘導或抑制細胞因子表達,并改變培養細胞的代謝、增殖特征及形態。由于支原體污染能影響幾乎每一個細胞參數,所以很多研究都強調常規檢測正在培養的細胞,以確保觀察到的結果不被支原體污染所損害。
目前已知的支原體種類約200種,污染細胞培養物的支原體種類有20多種。其中95%的污染是由五種支原體引起:精氨酸支原體(Mycoplasma arginini),發酵支原體(Mycoplasma fermentans),豬鼻支原體(Mycoplasma hyorhinis),口腔支原體(Mycoplasma orale)和萊氏無膽甾原體(Acholeplasma laidlawii)。精氨酸支原體和萊氏無膽甾原體為牛源性,主要由牛血清帶入;豬鼻支原體主要由胰酶(通常來源于豬)帶入;發酵支原體和口腔支原體為人源性,主要由實驗操作人員帶入,人源性的支原體污染還包括唾液支原體和人型支原體。原代細胞的支原體污染占比不到1%,但是種類最多,已知有17種支原體,主要為鼠、禽和犬來源的支原體,如雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum)、關節炎支原體(Mycoplasma arthritidis)、肺支原體(Mycoplasma pulmonis)、犬支原體(Mycoplasma canis)等,一般是從原始的動物組織中帶入進來,因此種類比較多,并且有不確定性。歐洲藥典(EUROPEAN PHARMACOPOEIA)2.6.7指定了六種需檢測的支原體:萊氏無膽甾原體,雞毒支原體,豬鼻支原體,口腔支原體,肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae)和滑液支原體(Mycoplasma synoviae)。由上述內容可知,引起細胞污染的支原體種類較為繁雜,并且可能存在未知種類,因此使用支原體通用性PCR引物更適合檢測支原體污染的需要,可以避免使用物種特異性引物可能導致的漏檢情況。
本試劑盒采用支原體通用性引物,可檢測上述提及的全部支原體,最低檢測極限(LOD,100%檢出時的最低模板濃度)為反應液中10個支原體基因組,能在2到3小時內獲得可靠的結果,是一種靈敏度高、特異性強、快速的檢測支原體污染的方法,具有以下特點: ①特異性引物是針對高度保守的支原體16S rRNA序列設計的,可用于檢測非常廣泛的支原體種類,不受真核細胞或細菌DNA干擾。經本試劑盒測試的支原體菌株涵蓋了所有常見的支原體污染種類; ②靈敏度極高,最低檢測極限僅需10個拷貝的支原體基因組; ③陽性對照所用引物與支原體檢測相同,可幫助判斷假陰性現象,避免假陰性導致的誤判; ④包含PCR反應所需的所有成分,只需進行一次PCR反應,降低了交叉污染的幾率,使用方便。
目前美國、歐洲、日本的藥典仍然推薦體外培養法作為檢測支原體污染的金標準。培養法通過使用選擇性培養基,可以達到很強的特異性,并且有很高的靈敏度,但是其缺點在于操作比較繁瑣,且耗時較長,完成一個完整的檢測需28天之久。對于大多數實驗而言,這是一個不可承受的時間成本。PCR檢測由于其特異性強、靈敏度高,且快速的特點,成為培養法的良好替代方案,正逐漸被世界各國所接受。
由于支原體污染比較隱蔽,所以建議給細胞定期做支原體檢測,以免在未察覺的情況下給您的實驗造成影響。可供參考的做法是:在新細胞進入實驗室時,以及細胞凍存入庫前,都應該做一下支原體

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上海炎熙生物科技有限公司

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